蛋白提取实验步骤

时间：2024-03-21 09:28:18 春鹏资料我要投稿

蛋白提取实验步骤

上海龙凤1314 shlf　　在学习、工作生活中，报告不再是罕见的东西，通常情况下，报告的内容含量大、篇幅较长。为了让您不再为写报告头疼，下面是小编帮大家整理的蛋白提取实验步骤，欢迎大家分享。

　　蛋白提取实验步骤：

上海龙凤1314 shlf　　1、细胞总蛋白提取

　　A、对于悬浮细胞: 离心收集细胞，每106细胞加250 ul RIPA（在使用前数分钟内加入蛋白酶抑制剂），振荡。如果需要提高蛋白浓度，可以适当减少细胞总蛋白提取试剂体积。

　　B、对于贴壁细胞:

　　a、用TBS冲洗细胞2-3次。最后一次彻底吸干残留液。

　　b、加入适当体积的 RIPA（使用前数分内加入蛋白酶抑制剂）于培养板、瓶内3-5分钟。期间反复晃动培养板、瓶，使试剂与细胞充分接触。

上海龙凤1314 shlf　　c、用细胞刮刀将细胞及试剂刮下，收集到1.5ml离心管中。

　　C、冰浴30min，期间用移液器反复吹打，确保细胞完全裂解。

　　D、12000g离心5min，收集上清，即为总蛋白溶液。

　　2、组织蛋白提取：

　　A、组织块用冷TBS洗涤2-3次，去除血污，剪成小块置于匀浆器。加入10倍组织体积本试剂（使用前数分钟内加入蛋白酶抑制剂）冰上彻底匀浆。如果需要提高蛋白浓度，可以适量减少该试剂体积。

　　B、将匀浆液转移至1.5ml离心管中，振荡。冰浴30min，期间用移液器反复吹打，确保细胞完全裂解。

　　C、12000g离心5min，收集上清，即为总蛋白溶液。

　　注意事项

上海龙凤1314 shlf　　1、组织尽可能新鲜，若不能及时提蛋白，组织标本应保存在-80℃冰箱，并避免反复冻融。

上海龙凤1314 shlf　　2、全程必须在冰上进行，避免蛋白降解。

上海龙凤1314 shlf　　3、蛋白酶抑制剂在水溶液中不稳定，需在RIPA使用前数分钟加入蛋白酶抑制剂。

　　4、裂解过程中如有溶液粘稠现象可用移液器（200μl）反复吹打，或再加入适量裂解液以保证充分裂解。

上海龙凤1314 shlf　　5、总蛋白溶液不稳定（蛋白酶依旧有活性）可在-80℃短时间保存，建议立即加入蛋白上样缓冲液变性后与-20℃保存，避免反复冻融。

上海龙凤1314 shlf　　蛋白质的分类，从来源上可以分为动物蛋白质、植物蛋白质；从营养学上可以分为完全蛋白质、半完全蛋白质、不完全蛋白质。

　　1.来源分类

上海龙凤1314 shlf　　（1）动物性蛋白质：主要包括一些动物的肉类（比如牛肉、猪肉、鱼肉、鸡肉等）以及蛋类（鸡蛋、鸭蛋、鹌鹑蛋等）、奶产品（牛奶、羊奶等）等，含有较多的氨基酸，有丰富的营养成分，易吸收。

上海龙凤1314 shlf　　（2）植物性蛋白质：主要来源于豆制品（豆腐、豆皮、豆浆等）或者是谷类（大米、小麦、小米等）等食品，含有不同含量的植物蛋白质。

　　2.营养学分类

上海龙凤1314 shlf　　（1）完全蛋白质中所含氨基酸相比较来说品种比较多，数量也充足，比如：奶制品、蛋类、动物肝脏等食物中的蛋白质。

　　（2）不完全蛋白质含有氨基酸种类和数量都比较少，例如动物明胶、玉米胶蛋白。

　　（3）半完全蛋白质氨基酸种类也比较多，但相比较来说含量不足，比如麦胶蛋白中的成份。

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