上海龙凤1314 shlf蚯蚓纤溶酶(EFE-3D)基因的合成及其在毕赤酵母中的表达

选择毕赤酵母偏爱密码子,分成32个长约48 bp且相互配对的寡核苷酸片段,合成蚯蚓纤溶酶基因EFE-3D.寡核苷酸片段经5'磷酸化后,通过错位拼接,PCR(聚合酶链式反应)一次性完成新基因的合成并且克隆至载体pPIC9K中.最后利用电穿孔法将新基因克隆至毕赤酵母表达系统并进行诱导表达,用免疫印记法检测表达产物,最后利用纤维平板确定其表达产物的活性为3 500 mm2/mL,1 L发酵液相当于48 mg天然蚯蚓纤溶酶活性.

作 者： 秦奕辉 储炬 黄文华 庄英萍 张嗣良 QIN Yi-hui CHU Ju HUANG Wen-hua ZHUANG Ying-ping ZHANG Si-liang   作者单位： 秦奕辉,储炬,庄英萍,张嗣良,QIN Yi-hui,CHU Ju,ZHUANG Ying-ping,ZHANG Si-liang(华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室,上海,200237)

黄文华,HUANG Wen-hua(上海国源生物技术有限公司,上海,200233) 

刊 名： 华东理工大学学报（自然科学版）  ISTIC PKU 英文刊名： JOURNAL OF EAST CHINA UNIVERSITY OF SCIENCE AND TECHNOLOGY(NATURAL SCIENCE EDITION)  年，卷(期)： 2006 32(4)  分类号： Q55  关键词： 毕赤酵母   蚯蚓纤溶酶   基因合成   密码子偏好性  

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